Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Каталожний номер: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) — це мультиплексний набір для кількісної ПЛР на основі РНК як шаблону.У процесі експерименту в одній пробірці проводили зворотну транскрипцію та кількісну ПЛР, що спростило проведення експерименту та знизило ризик зараження.У цьому наборі перший ланцюг кДНК був ефективно синтезований термостійкою зворотною транскриптазою та кількісно ампліфікований ДНК-полімеразою HotStart Tag.Набір в основному містить оптимізований МП-буфер, суміш ферментів тощо. Буферний розчин уже містить Mg2+і dNTP.Крім того, додано фактори, які можуть ефективно пригнічувати неспецифічну ПЛР-ампліфікацію та покращувати ефективність ампліфікації множинних реакцій КПЦР, що може забезпечити ефективність ампліфікації та проводити реакцію багаторазової ампліфікації.Для ефективного запобігання ризику аерозольного забруднення була додана система dUTP/UDG.
компоненти
1. Буфер
2. Ферментна суміш
Специфікація
| Гарячий старт | Вбудований гарячий старт |
| Спосіб виявлення | Праймер-зонд виявлення |
| Метод ПЛР | Одноетапна RT-qPCR |
| Полімераза | Taq ДНК-полімераза |
| Тип зразка | ДНК |
Умови зберігання
Продукт поставляється з сухим льодом і може зберігатися при -25~-15 ℃ протягом 1 року.Слід уникати частогозаморожування-відтавання.Рекомендується зберігати окремо.
Інструкції
1.Реакція система
| компоненти | Об'єм (мкл) | Остаточна концентрація |
| 2 × МП буфер | 12.5 | 1× |
| Ферментна суміш | 1 | - |
| Суміш праймер/зонд (2,5 мкМ) | 3 | 0,3 мкМ |
| Матрична РНК | 1-10 | - |
| H2O, вільна від РНКази | до 25 | - |
Примітки:
Обов’язково добре перемішайте перед використанням, уникайте надлишкових бульбашок, викликаних сильною вібрацією.
a.Концентрація праймера: Суміш праймера, включаючи мультиплексний праймер, залежно від ситуації оптимальна концентрація праймера може становити від 0,1 до 1,0 мкМ.
b.Концентрація зонда: Суміш зонда, включаючи різницю флуоресцентної групи мультиплексного маркування зонда, залежно від ситуації оптимальна концентрація зонда може становити від 0,05 до 0,5 мкМ.
в.Розведення шаблону: КПЦР є високочутливим, тому рекомендується розводити шаблон.Контрольне значення Ct підходить між 20 і 35.
d.Підготовка системи: Будь ласка, підготуйте на ультрачистому робочому столі, піпетці та реакційній пробірці без залишку нуклеази;рекомендується використовувати головку пістолета з фільтруючим елементом.Уникайте перехресного та аерозольного забруднення.
2. Оптимізований циклПротокол
| Цикл крок | темп. | час | Цикли |
| Зворотна транскрипція | 50 ℃a | 20 хв | 1 |
| Початково-денатураційний | 95 ℃ | 5 хв | 1 |
| Реакція посилення | 95 ℃ | 15 сек |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 сек c |
Примітки:
a.Зворотна транскрипція: температура може бути 42°C або 50°C.
b.Реакція ампліфікації: температуру регулюють відповідно до значення Tm розроблених праймерів.
в.Отримання сигналу флуоресценції: Будь ласка, встановіть експериментальну процедуру відповідно до вимог інструкції з приладу.
Примітки
Будь ласка, надягайте необхідні ЗІЗ, такі як лабораторний халат і рукавички, щоб забезпечити ваше здоров’я та безпеку.
