Універсальний премікс SYBR GREEN qPCR (синій)

Каталожний номер: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (на основі барвника) — це попередній розчин для 2x кількісної ПЛР-ампліфікації в режимі реального часу, що характеризується високою чутливістю та специфічністю, синього кольору та має ефект відстеження додавання зразка.Основний компонент ДНК-полімерази Taq використовує гарячий старт антитіла для ефективного пригнічення неспецифічної ампліфікації внаслідок відпалу праймера під час підготовки зразка.У той же час, формула додає стимулюючі фактори для підвищення ефективності ампліфікації реакції ПЛР і вирівнює ампліфікацію генів з різним вмістом GC (30 ~ 70%), так що кількісна ПЛР може отримати хорошу лінійну залежність у широкому кількісному відношенні. область.Цей продукт містить спеціальний барвник ROX Passive Reference Dye, який підходить для більшості інструментів qPCR.Немає необхідності регулювати концентрацію ROX на різних інструментах.Необхідно лише додати праймери та матриці, щоб підготувати реакційну систему до ампліфікації.

компоненти

Universal Blue qPCR Master Mix

Умови зберігання

Продукт постачається з пакетами з льодом і може зберігатися при температурі -25 ℃ ~ -15 ℃ протягом 18 місяців.При зберіганні або підготовці реакційної системи необхідно уникати сильного світлового опромінення.

Специфікація

Інструкції

1. Система реакції

[Примітка]: Ретельно перемішайте перед використанням, щоб уникнути надмірної кількості бульбашок від інтенсивного струшування.

a) Концентрація праймера: Кінцева концентрація праймера становить 0,2 мкмоль/л, її також можна регулювати в межах від 0,1 до 1,0 мкмоль/л, якщо це необхідно.

b) Концентрація матриці: якщо матриця є нерозведеним вихідним розчином кДНК, використовуваний об’єм не повинен перевищувати 1/10 загального об’єму реакції кПЦР.

c) Матричне розведення: рекомендовано розбавити вихідний розчин кДНК у 5-10 разів.Оптимальна кількість доданої матриці є кращою, коли значення Ct, отримане шляхом ампліфікації, становить 20-30 циклів.

d) Реакційна система: рекомендується використовувати 20 мкл або 50 мкл для забезпечення ефективності та повторюваності ампліфікації цільового гена.

e) Підготовка системи: будь ласка, готуйте в суперчистому стенді та використовуйте наконечники та реакційні пробірки без залишків нуклеази;рекомендується використовувати наконечники з фільтруючими картриджами.Уникайте перехресного та аерозольного забруднення.

2.Програма реагування

Стандартна програма

Швидка програма

[Примітка]: швидка програма підходить для переважної більшості генів, а стандартні програми можна спробувати для окремих складних генів вторинної структури.

a) Температура та час відпалу: відрегулюйте відповідно до довжини праймера та цільового гена.

b) Отримання флуоресцентного сигналу (★): будь ласка, встановіть експериментальну процедуру відповідно до вимог інструкції з використання приладу.

c) Крива плавлення: стандартну програму приладу можна використовувати в звичайному режимі.

3. Аналіз результатів 

Для кількісних експериментів були потрібні мінімум три біологічні повтори.Після реакції необхідно підтвердити криву ампліфікації та криву плавлення.

3.1 Крива посилення:

Стандартна крива посилення S-подібна.Кількісний аналіз є найбільш точним, коли значення Ct падає від 20 до 30. Якщо значення Ct менше 10, необхідно розбавити шаблон і провести тест повторно.Коли значення Ct знаходиться в межах 30-35, необхідно збільшити концентрацію матриці або об’єм реакційної системи, щоб покращити ефективність ампліфікації та забезпечити точність аналізу результатів.Коли значення Ct перевищує 35, результати тесту не можуть кількісно проаналізувати експресію гена, але можуть бути використані для якісного аналізу.

3.2 Крива плавлення:

Єдиний пік кривої плавлення вказує на те, що специфічність реакції хороша і кількісний аналіз можна виконати;якщо крива плавлення показує подвійні або багаторазові піки, кількісний аналіз не можна виконати.Крива плавлення показує подвійні піки, і необхідно визначити, чи є нецільовий пік димером праймера чи неспецифічною ампліфікацією за допомогою електрофорезу в ДНК-агарозному гелі.Якщо це димер праймера, рекомендується зменшити концентрацію праймера або переробити праймери з високою ефективністю ампліфікації.Якщо це неспецифічна ампліфікація, будь ласка, збільште температуру відпалу або змініть праймери зі специфічністю.

Примітки

Будь ласка, надягайте необхідні ЗІЗ, такі як лабораторний халат і рукавички, щоб забезпечити ваше здоров’я та безпеку！

Цей продукт ТІЛЬКИ для дослідницького використання！