Робустарт Taq ДНК-полімераза

ДНК-полімераза Robustart Taq — це ДНК-полімераза гарячого старту.Цей продукт може не тільки краще пригнічувати неспецифічну реакцію, спричинену неспецифічним відпалом праймерів або агрегацією праймерів у процесі підготовки та ампліфікації системи ПЛР.Таким чином, він має чудову специфічність і є більш ефективним для ампліфікації матриць з низькою концентрацією, а також підходить для мультиплексної реакції ампліфікації ПЛР.Крім того, цей продукт має дуже хорошу застосовність, і стабільні результати ампліфікації можна отримати в різних типах реакцій ПЛР.

компоненти

1.5 Од/мкл Робустарт Taq ДНК-полімераза

2.10 × ПЛР-буфер II (без Mg²+) (необов’язково)

3.25 мМ MgCl₂(необов'язково)

* 10 × ПЛР-буфер II (без Mg²+) не містить dNTP і Mg²+, додайте dNTP і MgCl₂при підготовці реакційної системи.

Рекомендовані програми

1.Швидке посилення.

2.Багаторазове посилення.

3.Пряма ампліфікація крові, мазків та інших зразків.

4.Виявлення респіраторних захворювань.

Умови зберігання

-20°C для тривалого зберігання, слід добре перемішати перед використанням, уникати частого заморожування-розморожування.

*Якщо після охолодження випадає осад, це нормально;перед змішуванням і використанням рекомендується довести до кімнатної температури.

Визначення одиниці

Одна активна одиниця (U) визначається як кількість ферменту, який включає 10 нмоль дезоксирибонуклеотиду в нерозчинний у кислоті матеріал при 74°C протягом 30 хвилин із використанням активованої ДНК сперми лосося як матриці/праймера.

Контроль якості

1.Електрофоретична чистота SDS-PAGE більше 98%.

2.Чутливість посилення, контроль від партії до партії, стабільність.

3.Відсутність екзогенної нуклеазної активності, відсутність екзогенної ендонуклеази або забруднення екзонуклеазою

Інструкції

Налаштування реакції

Примітки:

1) а.Буфер не містить dNTP і Mg²+, додайте dNTP і MgCl₂при підготовці реакційної системи.

2) б.Якщо використовується для ПЛР/кВТ-ПЛР, до реакційної системи слід додати флуоресцентні зонди.Зазвичай кінцева концентрація праймера 0,2 мкМ дає хороші результати;якщо продуктивність реакції низька, концентрацію праймера можна регулювати в діапазоні 0,2-1 мкМ.Концентрація зонда зазвичай оптимізована в діапазоні 0,1-0,3 мкМ.Можна провести експерименти з градієнтом концентрації, щоб знайти найкращу комбінацію праймера та зонда.

Термоциклічний протокол

Примітки

1.Швидкість ампліфікації швидкої ДНК-полімерази не повинна бути менше 1 кб/10 с.Швидкість підвищення та зниження температури, режим контролю температури та ефективність теплопровідності різних приладів для ПЛР сильно відрізняються, тому рекомендується оптимізувати оптимальні умови реакції для конкретного приладу для швидкої ПЛР.

2.Система є високоадаптивною, з високою специфічністю та чутливістю.

3.Підходить для використання як високочутливих реагентів для виявлення ПЛР і може використовуватися в реакціях мультиплексної ампліфікації ПЛР.

4.5′→3′ полімеразна активність, 5′→3′ екзонуклеазна активність;відсутність 3′→5′ екзонуклеазної активності;немає функції коректури.

5.Підходить для якісного та кількісного тестування ПЛР та RT-PCR.

6.3'-кінець продукту ПЛР є А, який можна безпосередньо клонувати у Т-вектор.

7.Триетапний метод рекомендований для праймерів з низькими температурами відпалу або для ампліфікації фрагментів довжиною понад 200 п.н.