Набір для визначення генотипу миші

Каталожний номер: HCR2021A

Цей продукт являє собою набір, призначений для швидкої ідентифікації генотипів мишей, включаючи неочищену екстракцію ДНК і систему ПЛР-ампліфікації.Продукт можна використовувати для ПЛР-ампліфікації безпосередньо з мишачого хвоста, вуха, пальця ноги та інших тканин після простого розщеплення буфером для лізису та протеїназою k.Немає нічного зброджування, екстракції фенолом-хлороформом або очищення колонки, що є простим і скорочує час, що вимагає експериментів.Продукт підходить для ампліфікації цільових фрагментів розміром до 2 кб і мультиплексних реакцій ПЛР з використанням до 3 пар праймерів.Суміш 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix містить генно-інженерну ДНК-полімеразу, Mg²⁺, dNTP та оптимізовану буферну систему для забезпечення високої ефективності ампліфікації та толерантності до інгібіторів, щоб можна було проводити ПЛР-реакції шляхом додавання матриці та праймерів і повторної гідратації продукту до 1×.Продукт ПЛР, ампліфікований цим продуктом, має помітну основу «А» на 3'-кінці і може бути використаний безпосередньо для клонування ТА після очищення.

компоненти

Умови зберігання

Продукти слід зберігати при -25~-15 ℃ протягом 2 років.Після розморожування буфер лізису можна зберігати при температурі 2~8 ℃ для короткочасного багаторазового використання та добре перемішувати під час використання.

застосування

Цей продукт підходить для нокаутного аналізу мишей, виявлення трансгенів, генотипування тощо.

Особливості

1.Проста робота: не потрібно витягувати геномну ДНК;

2.Широке застосування: підходить для прямої ампліфікації різних тканин миші.

Інструкції

1.Вивільнення геномної ДНК

1) Приготування лізату

Тканинний лізат готують відповідно до кількості зразків мишей, які підлягають лізуванню (тканинний лізат слід готувати на місці відповідно до дозування та ретельно перемішувати для використання), а пропорція реагентів, необхідних для одного зразка, така:

2) Підготовка зразка та лізис

Рекомендоване використання серветок

Візьміть відповідну кількість зразків тканини миші в чисті центрифужні пробірки, додайте 200 мкл свіжого тканинного лізату в кожну центрифужну пробірку, перемішайте та струсіть, потім інкубуйте при 55 ℃ протягом 30 хвилин, а потім нагрівайте при 98 ℃ протягом 3 хвилин.

3) Центрифугування

Добре струсіть лізат і центрифугуйте при 12 000 об/хв протягом 5 хвилин.Супернатант можна використовувати як матрицю для ПЛР-ампліфікації.Якщо шаблон потрібен для зберігання, перемістіть супернатант в іншу стерильну центрифужну пробірку та зберігайте при -20 ℃ протягом 2 тижнів.

2.ПЛР-ампліфікація

Зніміть суміш 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix з -20℃ і розморозьте на льоду, перемішайте догори дном і підготуйте реакційну систему ПЛР відповідно до наступної таблиці (працюйте на льоду):

Примітка:

a) Додана кількість не повинна перевищувати 1/10 системи, і якщо додано занадто багато, ПЛР-ампліфікація може бути пригнічена.

Рекомендовані умови ПЛР

Примітка:

a) Температура відпалу: з огляду на значення Tm праймера, рекомендовано встановити температуру відпалу на менше значення Tm праймера +3~5 ℃.

Поширені проблеми та рішення

1.Без цільових смужок

1) Надмірний продукт лізису.Виберіть найбільш відповідний обсяг шаблону, зазвичай не більше 1/10 системи;

2) Занадто великий розмір вибірки.Розведіть лізат у 10 разів, а потім ампліфікуйте або зменшіть розмір зразка та повторіть лізис;

3) Зразки тканин не свіжі.Рекомендується використовувати свіжі зразки тканин;

4) Погана якість грунтовки.Використовуйте геномну ДНК для ампліфікації, щоб перевірити якість праймера та оптимізувати дизайн праймера.

2.Неспецифічне посилення

1) Температура відпалу занадто низька, а число циклів занадто велике.Підвищити температуру відпалу і зменшити кількість циклів;

2) Концентрація шаблону занадто висока.Зменшіть кількість шаблону або розведіть шаблон у 10 разів після ампліфікації;

3) Низька специфічність праймера.Оптимізуйте дизайн грунтовки.

Примітки

1.Щоб уникнути перехресного забруднення між зразками, слід підготувати кілька інструментів для відбору проб, а поверхню інструментів можна очистити 2% розчином гіпохлориту натрію або очисником нуклеїнової кислоти після кожного відбору зразка, якщо потрібно повторне використання.

2.Рекомендується використовувати свіжі тканини миші, а об’єм зразка не повинен бути надто великим, щоб уникнути впливу на результати ампліфікації.

3.Лізисний буфер слід уникати частого заморожування-розморожування, і його можна зберігати при 2~8 ℃ для короткочасного багаторазового використання.При зберіганні при низькій температурі можливе випадання осаду, тому його необхідно повністю розчинити перед використанням.

4.Слід уникати частого заморожування-розморожування суміші для ПЛР, її можна зберігати при 4 ℃ для короткочасного повторного використання.

5.Цей продукт призначений лише для наукових експериментальних досліджень і не повинен використовуватися для клінічної діагностики чи лікування.