Дика ДНК-полімераза Taq
ДНК-полімераза Taq — це термостабільна ДНК-полімераза з Thermus aquaticus YT-1, яка має полімеразну активність 5′→3′ і ендонуклеазну активність 5′ клаптя.
компоненти
| компонент | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × буфер Taq | 2×1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| Taq ДНК-полімераза (5 ОД/мкл) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Умови зберігання
Транспортувати при температурі до 0°C і зберігати при -25°C~-15°C.
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість ферменту, який включає 15 нмоль dNTP у нерозчинний у кислоті матеріал за 30 хвилин при 75°C.
Контроль якості
1.Аналіз чистоти білка (SDS-PAGE):Чистота ДНК-полімерази Taq була ≥95%, визначена аналізом SDS-PAGE.
2.EndАктивність onuclease:Мінімум 5 одиниць ДНК-полімерази Taq з 1 мкг λДНК протягом 16 годин при 37 ℃ не призводить до виявленої деградації, як визначено.
3.Активність екзонуклеази:Мінімум 5 одиниць ДНК-полімерази Taq з 1 мкг λ-Hind Ⅲ розщепленої ДНК протягом 16 годин при 37 ℃ не призводить до виявленої деградації, як визначено.
4.Активність Nickase:Мінімум 5 одиниць ДНК-полімерази Taq з 1 мкг ДНК pBR322 протягом 16 годин при 37°C не призводить до виявленої деградації, як визначено.
5.Активність РНКази:Мінімум 5 ОД Taq ДНК-полімерази з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 16 годин при 37°C не призводить до виявленої деградації, як визначено.
6.кишкова паличкаДНК:5 ОД Taq ДНК-полімерази перевіряють на наявність геномної ДНК E. coli за допомогою кПЛР TaqMan з праймерами, специфічними для локусу 16S рРНК E. coli.Контамінація геномної ДНК E. coli становить ≤1 копії.
7.ПЛР-ампліфікація (5,0 кб лямбда-ДНК)- 50 мкл реакції, що містить 5 нг ДНК лямбда з 5 одиницями ДНК-полімерази Taq для 25 циклів ПЛР-ампліфікації, призводить до очікуваного продукту 5,0 кб.
Налаштування реакції
| компоненти | Обсяг |
| Шаблон ДНКa | необов'язковий |
| 10 мкМ Forward Primer | 1 мкл |
| 10 мкМ зворотний праймер | 1 мкл |
| Суміш dNTP (10 мМ кожен) | 1 мкл |
| 10×Taq буфер | 5 мкл |
| Taq ДНК-полімеразаb | 0,25 мкл |
| Вода без нуклеаз | До 50 мкл |
Примітки:
1) Оптимальна реакційна концентрація різних матриць різна.У наведеній нижче таблиці показано рекомендоване використання шаблону 50 мкл реакційної системи.
| ДНК | Сума |
| Геномний | 1 нг-1 мкг |
| Плазміда або вірус | 1 пг-1 нг |
2) Оптимальна концентрація ДНК-полімерази Taq може коливатися від 0,25 мкл~1 мкл у спеціалізованих застосуваннях.
Реакціяпрограма
| Крок | Температура(°C) | час | Цикли |
| Початкова денатураціяa | 95 ℃ | 5 хв | - |
| Денатурація | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 циклів |
| Відпалb | 60 ℃ | 15 с | |
| Розширення | 72 ℃ | 1 Кб/хв | |
| Остаточне розширення | 72 ℃ | 5 хв | - |
Примітки:
1) Початкова умова денатурації підходить для більшості реакцій ампліфікації та може бути змінена відповідно до складності структури матриці.Якщо структура шаблону складна, час попередньої денатурації можна збільшити до 5–10 хвилин, щоб покращити початковий ефект денатурації.
2) Температуру відпалу потрібно регулювати відповідно до значення Tm праймера, яке зазвичай встановлюється на 3~5 ℃ нижче, ніж значення Tm праймера;Для складних шаблонів необхідно відрегулювати температуру відпалу та подовжити час розширення для досягнення ефективної ампліфікації.
