Рназа А
Рибонуклеаза А (РНКаза) — це одноланцюговий поліпептид, що містить 4 дисульфідні зв'язки з молекулярною масою близько 13,7 кДа.РНКаза А є ендорібонуклеазою, яка специфічно розкладає одноланцюгову РНК за залишками C і U.Зокрема, розщеплення розпізнає фосфодіефірний зв’язок, утворений 5'-рибозою нуклеотиду та фосфатною групою на 3'-рибозі сусіднього піримідинового нуклеотиду, так що 2,3'-циклічні фосфати гідролізуються до відповідних 3 ′нуклеозидні фосфати (наприклад, pG-pG-pC-pA-pG розщеплюється РНКазою А з утворенням pG-pG-pCp і A-PG).РНКаза А найбільш активна в розщепленні одноланцюгової РНК.Рекомендована робоча концентрація 1-100 мкг/мл, сумісна з різними реакційними системами.Низьку концентрацію солі (0-100 мМ NaCl) можна використовувати для розрізання одноланцюгової РНК, дволанцюгової РНК і ланцюгів РНК, утворених гібридизацією РНК-ДНК.Однак при високій концентрації солі (≥0,3 М) РНКаза А специфічно розщеплює лише одноланцюгову РНК.
РНКаза А найчастіше використовується для видалення РНК під час підготовки плазмідної ДНК або геномної ДНК. Активність ДНКази під час процесу підготовки може легко вплинути на реакцію.Традиційний метод кип'ятіння на водяній бані можна використовувати для інактивації активності ДНКази.Цей продукт не містить ДНКази і протеази, і не потребує термічної обробки перед використанням.Крім того, цей продукт також можна використовувати в експериментах з молекулярної біології, таких як аналіз захисту РНКази та аналіз послідовності РНК.
Умови зберігання
Продукт можна зберігати при -25～-15℃, придатний протягом 2 років.
Інструкції
Це один із поширених методів приготування розчину для зберігання РНКази А.Його також можна приготуватиінші методи відповідно до традиційних методів у лабораторії чи довідковій літературі (наприклад,безпосереднє розчинення в 10 мМ Трис-HCl, pH 7,5 або розчині Трис-NaCl)
1. Використовуйте 10 мМ ацетату натрію (pH 5,2), щоб приготувати 10 мг/мл розчину для зберігання РНКази А.
2. Нагрівання при 100 ℃ протягом 15 хв
3. Охолодіть до кімнатної температури, додайте 1/10 об’єму 1 М Tris-HCl (рН 7,4), доведіть рН до 7,4 (длянаприклад, додайте 500 мл 10 г/мл розчину для зберігання РНКази 1M Tris-HCL, PH7,4)
4. Розфасований при -20 ℃ для зберігання в замороженому стані, який може бути стабільним до 2 років.
[Примітки]: при кип’ятінні розчину РНКази в нейтральних умовах утворюється осад РНКази;Варіть його при більш низькому pH, і якщо буде випадання осаду, це може спостерігатися, що може бути викликано наявністю білкових домішок.Якщо після кип’ятіння буде виявлено осад, домішки можна видалити за допомогою високошвидкісного центрифугування (13000 об/хв), а потім упакувати для зберігання в заморожуванні.
Інформація про Продукт
| Синоніми | Рибонуклеаза I;Панкреатична рибонуклеаза;Рибонуклеаза 3'-піримідноолігонуклеотидогідролаза;Рназа А;Ендорібонульцеаза I |
| Номер CAS | 9001-99-4 |
| Зовнішній вигляд | Білий ліофілізований порошок |
| Молекулярна вага | ~ 13,7 кДа (послідовність амінокислот) |
| Значення Ph | 7,6 (діапазон активності 6-10) |
| Відповідна температура | 60 ℃ (діапазон активності 15-70 ℃) |
| Активуючий засіб | Na2+.К+ |
| інгібітор | Інгібітор Рнази |
| Метод інактивації | Не можна інактивувати нагріванням, пропонується використовувати центрифужну колонку |
| Походження | Бичачий |
| Розчинність | Розчинний у воді (10 мг/мл) |
| Втрата на суху | ≤5,0% |
| Активність ферментів | ≥60 одиниць Куніца/мг |
| Ізоелектрична точка | 9.6 |
Примітки
Для вашої безпеки та здоров’я під час роботи надягайте лабораторні халати та одноразові рукавички.
