Ферменти УДГ/УНГ
UDG (урацил-ДНК-глікозилаза) може каталізувати гідроліз N-глікозидного зв’язку між основою урацилу та цукрово-фосфатним каркасом в оцДНК і дцДНК.Він може легко контролювати аерозольні забруднення та підходить для звичайних систем молекулярної біології, таких як PCR, qPCR, RT-qPCR та LAMP.
Технічні характеристики
| Хост експресії | Рекомбінантна E. coli з геном урацил ДНК-глікозилази |
| Молекулярна вага | 24. 8 кДа |
| Чистота | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Теплова інактивація | 95℃, 5~10 хв |
| Визначення одиниці | Одна одиниця (U) визначається як кількість ферменту, який необхідний для каталізації гідролізу l мкг dU-містить дцДНК протягом 30 хвилин при 25 ℃. |
Зберігання
Продукт слід зберігати при -25 ℃ ~ -15 ° C протягом двох років.
Інструкції
1.Приготування реакційної суміші ПЛР за наступною системою
| компоненти | Об'єм (мкл) | Кінцева концентрація |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| dUTP (10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 ммоль/вилуговування) | 1 | 0,2 ммоль/вилуговування |
| Шаблон ДНК | X | - |
| Primer1 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Праймер 2 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Taq ДНК-полімераза (5 ОД/мкл) | 0. 5 | 0,05 Од/мкл |
| Урацил ДНК-глікозилаза (УДГ/УНГ), 1 ОД/мкл | 1 | 1 Од/мкл |
| ddH₂O | До 50 | - |
Примітка: Відповідно до експериментальних вимог кінцеву концентрацію dTTP можна регулювати в межах 0,2-0,6 ммоль/л, а 0,2 ммоль/л dTTP можна додавати вибірково.
2.Процедура ампліфікації
| Крок циклу | Температура | час | Цикли |
| Деградація шаблону, що містить dU | 25℃ | 10 хв | 1 |
| Активація УДГ, початкова денатурація шаблону | 95 ℃ | 5~10 хв | 1 |
| Денатурація | 95 ℃ | 10 сек |
30-35 |
| Відпал | 60 ℃ | 20 сек | |
| Розширення | 72 ℃ | 30 сек/кб | |
| Остаточне розширення | 72 ℃ | 5 хв | 1 |
Примітка: Час реакції при 25°C можна регулювати протягом 5-10 хвилин відповідно до експериментальних вимог.
Примітки
1.УДГ активний у більшості буферів для реакції ПЛР.
2.Ферменти слід зберігати в ящику з льодом або на крижаній бані, коли вони використовуються, і повинні зберігатися при -20 °C відразу після використання.
3.Будь ласка, одягайте необхідні ЗІЗ, такі як лабораторний халат і рукавички, щоб забезпечити ваше здоров’я та безпеку!
