RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Цей продукт містить реакційний буфер, RT-Enzymes Mix (Bst ДНК-полімераза та термостійка зворотна транскриптаза), ліофілізовані захисні речовини та компоненти хромогенних барвників.Для використання просто використовуйте буфер, реакційний фермент і праймер змішуються та додаються до шаблону;Додавання ліофілізованого захисного засобу може бути прямим.Він був підключений до ліофілізатора та ліофілізований, і лише праймери та матриці додавались під час використання.Цей набір забезпечує швидке, чітке візуальне виявлення ампліфікації, причому негативна реакція позначається червоним кольором, а позитивна реакція позначається зміною на жовтий.
компонент
| компонент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Буфер петлі ампліфікації (з барвником) | 0,96 мл | 4,80 мл × 2 | 9,60 мл × 10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл × 10 |
| Ліофілізований протектор | 0,96 мл × 2 | 9,60 мл × 2 | 9,60 мл × 20 |
Додатки
Для ізотермічної ампліфікації ДНК або РНК.
Умови зберігання
Транспортується з сухим льодом, зберігається при -25 ~ -15 ℃.Уникайте частого заморожування-розморожування, продукт придатний протягом 12 місяців.
Протокол
1.Розморозьте реакційний буфер при кімнатній температурі.Коротко перемішайте або переверніть пробірки кілька разів, щоб ретельно перемішати, потім відцентрифугуйте, щоб зібрати рідину на дно пробірки.
2.Підготовка реакційної системи.Цей реагент можна приготувати у двох реакційних системах: рідкої реакційної суміші та ліофілізованої системної суміші.
1) Приготуйте рідку реакційну суміш
| компонент | Обсяг |
| Буфер петлі ампліфікації (з барвником) | 10 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| 10 × грунтувальна сумішa | 5 мкл |
| Шаблони ДНК/РНК b | × мкл |
| Вода без нуклеаз | До 50 мкл |
2) Суміш системи ліофілізації
① Приготуйте ліофілізовану суміш
| компонент | Обсяг |
| Буфер петлі ампліфікації (з барвником) | 10 мкл |
| Ліофілізований протектор | 20 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| Вода без нуклеаз | До 50 мкл |
② Ліофілізація: підготовлену суміш ліофілізували в системі 50 мкл
③ Приготуйте реакційну суміш
| компонент | Обсяг |
| Ліофілізована суміш | 1 шт |
| 10 × грунтувальна сумішa | 5 мкл |
| Шаблони ДНК/РНК b | × мкл |
| Вода без нуклеаз | До 50 мкл |
Примітки:
1) а.10 × праймерна суміш: 16 мкМ FIP/BIP, 2 мкМ F3/B3, 4 мкМ Loop F/B;
2) б.DEPC (водорозчинний) рекомендується для нуклеїнової кислоти templ.
1.Інкубуйте при 65°C протягом 30-45 хвилин, які можна продовжити відповідно до зміни кольору Час реакції.
2.Неозброєним оком жовтий був позитивним, а червоний негативним.
Примітки
1.На дні пробірки з буфером може з’явитися сіль, ненадовго перемішайте або переверніть пробірки кілька разів, щоб ретельно перемішати при кімнатній температурі.
2.Температуру реакції можна оптимізувати між 62 ℃ і 68 ℃ відповідно до стану праймерів.
3.Упаковані реагенти не повинні залишатися на повітрі протягом тривалого часу.
4.Реакція зміни кольору на червоний і жовтий залежить від зміни рН реакційної системи, будь ласка, не використовуйте розчин для зберігання трис-нуклеїнової кислоти, рекомендовано використовувати ddH2O запасена нуклеїнова кислота;
5.Експеримент має бути стандартизованим, включаючи підготовку реакційної системи, ліофілізацію, обробку зразка та процес додавання зразка;
6.Щоб уникнути забруднення, рекомендується підготувати реакційну систему в ультрачистому стенді, в іншому місці Додайте шаблони до витяжної шафи кімнати, щоб уникнути помилкових позитивних перешкод.
