Multiplex qPCR Probe Premix
Каталожний номер: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) — це попередній розчин для 2 × кількісної ПЛР-ампліфікації в реальному часі, що характеризується високою чутливістю та специфічністю, має синій колір і має ефект додавання зразка.Цей продукт є попередньо змішаним реагентом 2× Mix, який дозволяє проводити до чотирьох флуоресцентних кількісних реакцій ПЛР в одній реакційній лунці.Цей продукт містить метод генетично модифікованих антитіл до гарячого старту ферменту Taq, що значно покращує чутливість і специфічність ампліфікації.У той же час цей продукт глибоко оптимізував мультиреакційний буфер, який може підвищити ефективність ампліфікації реакції та сприяти ефективній ампліфікації шаблонів з низькою концентрацією.Цей продукт можна використовувати для генотипування та мультиплексного кількісного аналізу.
Специфікація
| Гарячий старт | Вбудований гарячий старт |
| Спосіб виявлення | Праймер-зонд виявлення |
| Метод ПЛР | КПЦР |
| Полімераза | Taq ДНК-полімераза |
| Тип зразка | ДНК |
Умови зберігання
Продукт поставляється з сухим льодом і може зберігатися при -25~-15 ℃ протягом 2 років.
Інструкції
1. Реакціясистема
| компоненти | Об'єм (мкл) | Остаточна концентрація |
| 2× TaqMan Multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Ґрунтовка (10 мкмоль/л) a | × | 0,1 - 0,5 мкмоль/л |
| Суміш зонда (10 мкмоль/л)b | × | 50 - 250 нмоль/л |
| Еталонний барвник Rox | 0,5 | 1× |
| Матрична ДНК/кДНК | 1-10 | - |
| ddH2O | до 25 | - |
Примітки:Ретельно перемішайте перед використанням, щоб уникнути надмірної кількості бульбашок від інтенсивного струшування.
a.Концентрація праймерів: суміш праймерів містить кілька пар праймерів, зазвичай кожен праймер у кінцевій концентрації 0,2 мкмоль/л, а також може бути відрегульований між 0,1 і 0,5 мкмоль/л залежно від обставин.
b.Концентрація зонда: Probe Mix містить кілька зондів з різними сигналами флуоресценції, і концентрацію кожного зонда можна регулювати в межах від 50 до 250 нмоль/л відповідно до конкретної ситуації.
1.Посилання на барвник Rox: використовується на інструментах для ампліфікації ПЛР у реальному часі, таких як Applied Biosystems, для виправлення помилки сигналу флуоресценції, що генерується між лунками;цей продукт не містить посилання на барвник Rox.За потреби рекомендується використовувати Cas#10200.
2.Розведення шаблону: КПЦР є високочутливим, тому для використання рекомендується розводити шаблон.Якщо матрицею є вихідний розчин кДНК, об’єм матриці не повинен перевищувати 1/10 загального об’єму.
3.Реакційна система: 25 мкл, 30 мкл або 50 мкл рекомендується для забезпечення ефективності та повторюваності ампліфікації цільового гена.
4.Підготовка системи: Будь ласка, підготуйтеся в суперчистому стенді та використовуйте наконечники та реакційні пробірки без залишків нуклеази;рекомендується використовувати наконечники з фільтруючими картриджами.Уникайте перехресного та аерозольного забруднення.
2.Програма реагування
| Крок циклу | темп. | час | Цикли |
| Початково-денатураційний | 95 ℃ | 5 хв | 1 |
| Денатурація | 95 ℃ | 15 сек | 45 |
| Відпал/Нарощування | 60 ℃ | 30 сек |
Примітки:
1.Відпал/подовження: температуру та час можна відповідним чином регулювати відповідно до розробленого значення Tm праймера.
2.Отримання сигналу флуоресценції: час отримання сигналу флуоресценції, необхідний для різних інструментів виявлення qPCR, різний, будь ласка, встановіть відповідно до мінімального обмеження часу.Час кількох поширених інструментів встановлюється наступним чином:
20 с: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 секунда: Applied Biosystems 7300
32 секунди: Applied Biosystems 7500
Примітки
Будь ласка, одягайте необхідні ЗІЗ, такі як лабораторний халат і рукавички, щоб забезпечити ваше здоров’я та безпеку!
