ДНКаза I (вільна Рназа) (5u/ul)
Каталожний номер: HC4007A
ДНКаза I (дезоксирибонуклеаза I) є ендодезоксирибонуклеазою, яка може перетравлювати одно- або дволанцюгову ДНК.Він розпізнає та розщеплює фосфодіефірні зв’язки з утворенням монодезоксинуклеотидів або одно- або дволанцюгових олігодезоксинуклеотидів з фосфатними групами на 5'-кінці та гідроксилом на 3'-кінці.Активність ДНКази I залежить від Ca2+і може бути активований іонами двовалентних металів, таких як Mn2+і Zn2+.5 мМ Ca2+захищає фермент від гідролізу.У присутності Mg2+, фермент міг випадковим чином розпізнавати та розщеплювати будь-яку ділянку будь-якого ланцюга ДНК.У присутності Мн2+, подвійні ланцюги ДНК можна одночасно розпізнавати та розщеплювати майже в тому самому місці з утворенням плоских кінців фрагментів ДНК або липких кінців фрагментів ДНК з 1-2 виступаючими нуклеотидами.
компоненти
| Ім'я | 0,1 КУ | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| ДНКаза I, без РНКази | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Умови зберігання
-25 ℃ ~ -15 ℃ для зберігання;Транспортування під льодом.
Інструкції
1. Приготуйте реакційний розчин у пробірці, вільній від РНКази, відповідно до наведених нижче пропорцій:
| компонент | Обсяг |
| РНК | X мкг |
| 10 × буфер ДНКази I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКази (5U/мкл) | 1 ОД на мкг РНК① |
| ddH2O | До 10 мкл |
Примітка: ①Обчисліть об’єм ДНКази I, який потрібно додати, виходячи з кількості РНК.
2. 37 ℃ протягом 15 хвилин;
3. Додайте 0,5 М EDTA до кінцевої концентрації 2,5 мМ ~ 5 мМ і нагрівайте при 65 ℃ протягом 10 хвилин, щоб зупинити реакцію.Зразок можна безпосередньо використовувати для наступної реакції, наприклад зворотної транскрипціїексперимент.
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість ферменту, яка повністю розкладає 1 мкг pBR322ДНК за 10 хвилин при 37 ℃.
Контроль якості
РНКаза:5 ОД ДНКази I з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 4 годин при 37 ℃ не призводить до розкладання яквизначають за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.
Примітки
1. Будь ласка, приготуйте 0,5 MEDTA самостійно.
2. Використовуйте 1 ОД ДНКази I на мкг РНК.Однак, якщо РНК менше 1 мкг, використовуйте 1U ДНКазу I.
3. Будь ласка, помістіть фермент на лід під час роботи.
