Bst 2.0 ДНК-полімераза (без гліцерину)
Bst ДНК-полімераза V2 походить від ДНК-полімерази I Bacillus stearothermophilus, яка має активність ДНК-полімерази 5′→3′ і сильну активність заміщення ланцюга, але не має активності екзонуклеази 5′→3′.Bst ДНК-полімераза V2 ідеально підходить для зміщення ланцюгів, ізотермічної ампліфікації LAMP (ізотермічна ампліфікація, опосередкована петлею) і швидкого секвенування.
компоненти
| компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstДНК-полімераза V2 (без гліцерину) (8U/мкл) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфер | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100 мМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Додатки
1. ЛАМПОВЕ ізотермічне посилення
2. Реакція заміщення одного ланцюга ДНК
3.Високе секвенування гена GC
4. Секвенування ДНК рівня нанограм.
Умови зберігання
Транспортувати при температурі до 0°C і зберігати при -25°C~-15°C.
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість ферменту, який включає 25 нмоль dNTP у нерозчинний у кислоті матеріал за 30 хвилин при 65°C.
Контроль якості
1.Аналіз чистоти білка (SDS-PAGE):Чистота Bst ДНК-полімерази V2 становить ≥99%, визначена за допомогою SDS-PAGE аналізу з використанням виявлення Кумасі Блю.
2.Активність екзонуклеази:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 одиниць Bst ДНК-полімерази V2 з 1 мкг λ-Hind Ⅲ розщепленої ДНК протягом 16 годин при 37 ℃, не призводить до виявленої деградації, як визначено.
3.Активність Nickase:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 ОД Bst ДНК-полімерази V2 з 1 мкг pBR322 ДНК протягом 16 годин при 37°C, не призводить до виявленої деградації, як визначено.
4.Активність РНКази:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 одиниць Bst ДНК-полімерази V2 з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 16 годин при 37°C, не призводить до виявленої деградації, як визначено.
5.ДНК E. coli:120 ОД Bst ДНК-полімерази V2 перевіряють на наявність геномної ДНК E. coli за допомогою кПЛР TaqMan з праймерами, специфічними для локусу 16S рРНК E. coli.Контамінація геномної ДНК E. coli становить ≤1 копії.
Реакція LAMP
| компоненти | 25мкл |
| 10×HC Bst V2 буфер | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100 мМ) | 1,5 мкл |
| dNTP (10 мМ кожен) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 Зелений (25×)a | 1,0 мкл |
| Суміш грунтовкиb | 6 мкл |
| Bst ДНК-полімераза V2 (без гліцерину) (8 ОД/мкл) | 1 мкл |
| Шаблон | × мкл |
| ddH₂O | До 25 мкл |
Примітки:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Відповідно до експериментальних потреб, інші барвники можуть бути використані як замінники;
2) б.Праймерна суміш: отримана шляхом змішування 20 мкМ FIP, 20 мкМ BIP, 2,5 мкМ F3, 2,5 мкМ B3, 5 мкМ LF, 5 мкМ LB та інших об’ємів.
Реакція і стан
1 × буфер HC Bst V2, температура інкубації становить від 60°C до 65°C.
Теплова інактивація
80 °C, 20 хв
