ДНК-полімераза Warm Start Bst 2.0 (без гліцерину)

Bst ДНК-полімераза V2 походить від ДНК-полімерази I Bacillus stearothermophilus, яка має активність ДНК-полімерази 5′→3′ і сильну активність заміщення ланцюга, але не має активності екзонуклеази 5′→3′.Bst ДНК-полімераза V2 ідеально підходить для зміщення ланцюгів, ізотермічної ампліфікації LAMP (ізотермічна ампліфікація, опосередкована петлею) і швидкого секвенування.Bst ДНК-полімераза V2 — це версія гарячого старту на основі Bst ДНК-полімерази V2 (HC5005A), отриманої за допомогою технології оборотної модифікації, яка може пригнічувати активність ДНК-полімерази за кімнатної температури, тому реакційну систему можна використовувати та формулювати за кімнатної температури, щоб запобігти несправності - специфічне посилення та підвищення ефективності реакції, і цю версію можна ліофілізувати.Крім того, його активність вивільняється при високих температурах, тому немає потреби в окремому етапі активації.

компоненти

Bst ДНК-полімераза V2 (без гліцерину) (8U/мкл)

Додатки

1.LAMP ізотермічне посилення

2.Реакція заміщення одного ланцюга ДНК

3.Високе секвенування генів GC

4.Секвенування ДНК нанограммового рівня.

Умови зберігання

Транспортувати при температурі до 0°C і зберігати при -25°C~-15°C.

Визначення одиниці

Одна одиниця визначається як кількість ферменту, який включає 25 нмоль dNTP у нерозчинний у кислоті матеріал за 30 хвилин при 65°C.

Контроль якості

1.Аналіз чистоти білка (SDS-PAGE):Чистота Bst ДНК-полімерази V2 становить ≥99%, визначена за допомогою SDS-PAGE аналізу з використанням виявлення Кумасі Блю.

2.Eндонуклеазадіяльність:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 одиниць Bst ДНК-полімерази V2 з 1 мкг λДНК протягом 16 годин при 37 ℃, не призводить до виявленої деградації, як визначено.

3.Активність екзонуклеази:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 одиниць Bst ДНК-полімерази V2 з 1 мкг λ-Hind Ⅲ розщепленої ДНК протягом 16 годин при 37 ℃, не призводить до виявленої деградації, як визначено.

4.Активність Nickase:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 ОД Bst ДНК-полімерази V2 з 1 мкг pBR322 ДНК протягом 16 годин при 37°C, не призводить до виявленої деградації, як визначено.

5.Активність РНКази:Інкубація 50 мкл реакційної суміші, що містить мінімум 8 одиниць Bst ДНК-полімерази V2 з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 16 годин при 37°C, не призводить до виявленої деградації, як визначено.

6.кишкова паличкаДНК:120 ОД Bst ДНК-полімерази V2 перевіряють на наявність геномної ДНК E. coli за допомогою кПЛР TaqMan з праймерами, специфічними для локусу 16S рРНК E. coli.Контамінація геномної ДНК E. coli становить ≤1 копії.

Реакція LAMP

Примітки:

1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Відповідно до експериментальних потреб, інші барвники можуть бути використані як замінники;

2) б.Праймерна суміш: отримана шляхом змішування 20 мкМ FIP, 20 мкМ BIP, 2,5 мкМ F3, 2,5 мкМ B3, 5 мкМ LF, 5 мкМ LB та інших об’ємів.

Реакція і стан

1 × буфер HC Bst V2, температура інкубації становить від 60°C до 65°C.

Теплова інактивація

 80°C, 20 хв