Набір для екстракції вірусної ДНК/РНК
Цей набір підходить для швидкого виділення високочистої вірусної ДНК/РНК із таких зразків, як мазки з носоглотки, тампони з навколишнього середовища, супернатанти клітинних культур і супернатанти тканинних гомогенатів.Набір заснований на технології очищення кремнеземною мембраною, яка усуває необхідність використання органічних розчинників фенол/хлороформ або трудомісткого спиртового осадження для вилучення вірусної ДНК/РНК високої якості.Отримані нуклеїнові кислоти вільні від домішок і готові до використання в подальших експериментах, таких як зворотна транскрипція, ПЛР, ПЛР-ПЛР, ПЛР у реальному часі, секвенування наступного покоління (NGS) і Нозерн-блот.
Умови зберігання
Зберігати при 15 ~ 25 ℃ і транспортувати при кімнатній температурі
компоненти
| компоненти | 100RXNS |
| Буфер ВЛ | 50 мл |
| Буфер RW | 120 мл |
| ddH2 O без РНКаз | 6 мл |
| Колонки FastPure RNA | 100 |
| Пробірки для збору (2 мл) | 100 |
| Пробірки для збору без РНКаз (1,5 мл) | 100 |
Буфер VL:Забезпечте середовище для лізису та зв'язування.
Буфер RW:Видалити залишки білка та інші домішки.
ddH2O без РНКази:Елююйте ДНК/РНК з мембрани в спіновій колонці.
Стовпці FastPure RNA:Спеціально адсорбують ДНК/РНК.
Пробірки для збору 2 мл:Зібрати фільтрат.
Пробірки для збору без РНКаз 1,5 мл:Зберіть ДНК/РНК.
Додатки
Назофарингеальні мазки, тампони з навколишнього середовища, супернатанти клітинних культур і супернатанти тканинних гомогенатів.
Самостійна підготовка Матерials
Наконечники піпеток без РНКаз, центрифужні пробірки без РНКаз на 1,5 мл, центрифуга, вихровий змішувач і піпетки.
Процес експерименту
Виконайте всі наступні кроки в кабінеті біозахисту.
1. Додайте 200 мкл зразка в центрифужну пробірку без РНКази (доповніть PBS або 0,9% NaCl у разі недостатньої кількості зразка), додайте 500 мкл буфера VL, добре перемішайте, перемішуючи протягом 15–30 секунд, і центрифугуйте. на короткий час, щоб зібрати суміш на дні пробірки.
2. Помістіть колонки FastPure RNA у пробірки для збору 2 мл.Перенесіть суміш із етапу 1 у колонки FastPure RNA, центрифугуйте при 12 000 об/хв (13 400 × g) протягом 1 хвилини та викиньте фільтрат.
3. Додайте 600 мкл буфера RW до колонок FastPure RNA, центрифугуйте при 12 000 об/хв (13 400 × g) протягом 30 секунд і викиньте фільтрат.
4. Повторіть крок 3.
5. Центрифугуйте порожню колонку при 12 000 об/хв (13 400 × g) протягом 2 хв.
6. Обережно перемістіть колонки FastPure RNA у нові пробірки для збору без РНКаз об’ємом 1,5 мл (надаються в наборі) і додайте 30–50 мкл ddH2O без РНКаз у центр мембрани, не торкаючись колонки.Дайте постояти при кімнатній температурі протягом 1 хвилини та центрифугуйте при 12 000 об/хв (13 400 × g) протягом 1 хвилини.
7. Викиньте колонки FastPure RNA.ДНК/РНК можна використовувати безпосередньо для наступних аналізів або зберігати при -30~-15°C протягом короткого періоду або -85~-65°C протягом більш тривалого періоду.
Примітки
Тільки для дослідницького використання.Не для використання в діагностичних процедурах.
1. Попередньо врівноважте зразки до кімнатної температури.
2. Віруси дуже заразні.Перед початком експерименту переконайтеся, що вжито всіх необхідних заходів безпеки.
3. Уникайте повторного заморожування та розморожування зразка, оскільки це може призвести до деградації або зниження виходу екстрагованої вірусної ДНК/РНК.
4. Самопідготовлене обладнання включає наконечники піпеток без РНКаз, центрифужні пробірки без РНКаз на 1,5 мл, центрифугу, вихровий змішувач і піпетки.
5. Під час використання набору одягайте лабораторний халат, одноразові латексні рукавички та одноразову маску та використовуйте витратні матеріали, що не містять РНКази, щоб мінімізувати ризик зараження РНКазою.
6. Виконайте всі кроки при кімнатній температурі, якщо не вказано інше.
Механізм і робочий процес
