Термочутливий UNG
Температурно чутливий UNG (TS-UNG) – це отриманий шляхом рекомбінантної експресії в E. coli.Фермент каталізує вивільнення вільного урацилу з одноланцюгової та дволанцюгової ДНК, що містить урацил, і неактивний щодо РНК.Порівняно зі звичайним ферментом UNG походження гена E. coli, фермент TS-UNG має вищу активність при низьких температурах (20 ℃ ~ 37 ℃), чутливий до температури та легко інактивується (50 ℃), уникаючи деградації ампліфікації, що містить dUTP продуктів при кімнатній температурі шляхом залишкової активності, яка може залишитися після інактивації звичайного ферменту UNG.Таким чином, фермент TS-UNG підходить не тільки для реакції запобігання контамінації ПЛР, але також добре поєднується з програмою ампліфікації RT-PCR і може бути використаний у реакції запобігання контамінації ПЛР.
Рекомендоване застосування
Запобігання забрудненню Посилення
Умови зберігання
-20°C для тривалого зберігання, слід добре перемішати перед використанням, уникати частого заморожування-розморожування.
Буфер зберігання
20 мМ трис-HCl (pH 7,5), 100 мМ NaCl, 0,1 мМ EDTA, 1 мМ DTT, стабілізатор, 50% гліцерин.
Визначення одиниці
Кількість ферменту, необхідного для розкладання 1 мкг одноланцюгової ДНК, що містить основи dU, за 1 годину при 37°C становить 1 одиницю активності (U).
Контроль якості
1.Електрофоретична чистота SDS-PAGE більше 98%
2.Активність деградації, контроль від партії до партії, стабільність
3.Відсутність екзогенної нуклеазної активності, відсутність екзогенної ендонуклеази або забруднення екзонуклеазою.
Інструкції
| компоненти | Об'єм (мкл) | Кінцева концентрація |
| 10 × ПЛР-буфер (без dNTP, Mg²+безкоштовно) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкМ |
| dUTP (замінити dTTP) | - | 200-600 мкМ |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мМ |
| 5 Од/мкл Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 ОД/мкЛТС-УНГ | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × грунтувальна сумішa | 2 | 1× |
| Шаблон | - | <1 мкг/реакцію |
| ddH₂O | До 50 | - |
Примітка: a: якщо використовується для ПЛР/кВТ-ПЛР, флуоресцентний зонд слід додати в реакційну систему.Зазвичай кінцева концентрація праймера 0,2 мкМ може дати хороші результати;коли продуктивність реакції погана, концентрацію праймера можна регулювати в діапазоні 0,2-1 мкМ.Зазвичай концентрація зонда оптимізована в діапазоні 0,1-0,3 мкМ.Можна провести експерименти з градієнтом концентрації, щоб знайти найкращу комбінацію праймера та зонда.
Примітки
1.Оптимальна температура реакції ферменту TS-UNG є відносно низькою, і її можна оптимізувати в діапазоні 20 ℃ ~ 37 ℃, дозування ферменту та час реакції можна оптимізувати в діапазоні 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 хв.;і фермент може бути інактивований у процесі зворотної транскрипції.
2.Він підходить для ПЛР та RT-PCR для запобігання зараженню.
3.Уникайте частого заморожування-розморожування та не піддавайте значним коливанням температури.
4.Різні гени, які підлягають ампліфікації, мають різну ефективність використання dUTP і чутливість до ферменту UNG, тому, якщо використання системи UNG призводить до зниження чутливості виявлення, систему реакції слід налаштувати та оптимізувати, якщо вам потрібна технічна підтримка, будь ласка, зв’яжіться з Наша компанія.
