One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Каталожний номер: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix призначений для кількісного визначення флуоресценції на основі барвника SYBR Green I.Використовуючи генно-специфічні праймери, реакції зворотної транскрипції та КПЦР виконуються в одній пробірці, усуваючи необхідність повторного відкриття кришки та піпетування, що значно покращує ефективність аналізу та знижує ризик зараження.Для зразків РНК у наборі використовується термостійка зворотна транскриптаза для ефективного синтезу кДНК і ДНК-полімераза HotStart Taq для кількісної ампліфікації.За оптимізованою буферною системою чутливість набору може досягати 0,1 пг для мішеней з високим ступенем експресії та 1 пг для мішеней із помірною експресією.Набір підходить для ампліфікації та кількісного визначення зразків ДНК.Це дозволяє чутливо виявляти та кількісно визначати нуклеїнові кислоти з різних зразків рослин і тварин, клітин і мікроорганізмів.
компоненти
| No | Ім'я | Обсяг | Обсяг |
| 1 | Розширений буфер | 250 мкл | 2×1,25 мл |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | Без РНКази H2O | 250 мкл | 2×1,25 мл |
Умови зберігання
Цей продукт слід зберігати при температурі -25 ~ -15 ℃ у захищеному від світла місці протягом 1 року.
Інструкції
1. Конфігурація системи реагуванняd
| компоненти | Об'єм (мкл) | Об'єм (мкл) | Кінцева концентрація |
| Розширений буфер | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Зворотний праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| РНК шаблонb | X | X | - |
| Без РНКази H2Оc | до 25 | до 50 | - |
Примітки:
1) а.ТКінцева концентрація праймера становила 0,2 мкмоль/л, яку також можна було регулювати в межах від 0,1 до 1 мкмоль/л відповідно.
2) б.Реагент є надзвичайно чутливим, із загальною РНК у діапазоні 1 пг-1 мкг, і тестування зразків людини показало оптимальне введення 1 пг-100 нг, контролюючи загальне значення Ct у діапазоні 15-30 відповідно.
3) c.Рекомендується використовувати 20 мкл або 50 мкл для забезпечення достовірності та відтворюваності ампліфікації цільового гена.
4) d.Будь ласка, підготуйтеся на ультрачистому стенді та використовуйте наконечники та реакційні пробірки без залишків нуклеази;рекомендуються наконечники з фільтруючими картриджами.Уникайте перехресного та аерозольного забруднення.
2.Програма реагування
| Крок циклу | темп. | час | Цикли |
| Зворотна транскрипція | 50 ℃a | 6 хв | 1 |
| Початкова денатурація | 95 ℃ | 5 хв | 1 |
| Реакція посилення | 95 ℃ | 15 сек | 40 |
| 60 ℃b | 30 сек | ||
| Стадія кривої плавлення | Стандартні параметри приладу | 1 | |
Примітки:
1) а.Температуру зворотної транскрипції можна вибрати між 50-55°C відповідно до експериментальних потреб.Для зразків ДНК процес зворотної транскрипції можна опустити.
2) б.В особливих випадках температуру відпалу/подовження можна регулювати відповідно до значення Tm праймера, рекомендовано 60°C.
Примітки
1. Цей продукт призначений лише для наукового використання.
2. Для вашої безпеки працюйте в лабораторних халатах і одноразових рукавичках.
