Інгібітор Рнази (без гліцерину)
Інгібітор мишачої РНКази - це рекомбінантний інгібітор мишачої РНКази, експресований та очищений з E.coli.Він зв’язується з РНКазою A, B або C у співвідношенні 1:1 за допомогою нековалентного зв’язку, тим самим пригнічуючи активність трьох ферментів і захищаючи РНК від деградації.Однак він не ефективний проти РНКази 1, РНКази T1, нуклеази S1, РНКази H або РНКази Aspergillus.Інгібітор мишачої РНКази був протестований за допомогою RT-PCR, RT-qPCR та IVT мРНК і був сумісний з різними комерційними зворотними транскриптазами, ДНК-полімеразами та РНК-полімеразами.
У порівнянні з інгібіторами людської РНКази інгібітор мишачої РНКази не містить двох цистеїнів, які є дуже чутливими до окислення, що спричиняє інактивацію інгібітора.Це робить його стабільним при низьких концентраціях DTT (менше 1 мМ).Ця особливість робить його придатним для використання в реакціях, де високі концентрації DTT є несприятливими для реакції (наприклад, RT-PCR у реальному часі).
Aдодаток
Цей продукт можна широко використовувати в будь-якому експерименті, де можливе втручання РНКази, щоб уникнути деградації РНК, наприклад:
1. Синтез кДНК першого ланцюга, RT-PCR, RT-qPCR тощо;
2. Захист РНК від деградації при транскрипції/трансляції in vitro (наприклад, реплікація вірусу in vitro);
3. Пригнічення активності РНКази під час виділення та очищення РНК.
Умови зберігання
Зберігати при -25～-15℃;
Цикли заморожування-розморожування ≤ 5 разів;
Термін дії 1 рік.
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість інгібітора РНКази, необхідної для інгібування активності 5 нг РНКази А на 50%.
Молекулярна вага
Інгібітор РНКази (без гліцерину) є білком 50 кДа.
Контроль якості
Екзонуклеаза діяльність:
Інкубація 40 ОД ферменту з 1 мкг λ-Hind III перевареної ДНК протягом 16 годин при 37°C не призвела до виявлення деградації ДНК, як це було визначено електрофорезом у гелі.
Ендонуклеазна активність:
Інкубація 40 ОД ферменту з 1 мкг λ ДНК протягом 16 годин при 37°C не призвела до виявленої деградації ДНК, як це було визначено електрофорезом у гелі.
Надрізання діяльність:
Інкубація 40 ОД ферменту з 1 мкг pBR322 протягом 16 годин при 37 ℃ призвела до відсутності помітної деградації ДНК, як це було визначено електрофорезом у гелі.
РНКаза діяльність:
Інкубація 40 ОД ферменту з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 4 годин при 37 ℃ не призвела до виявленої деградації РНК, як це було визначено електрофорезом у гелі.
E.coli ДНК:
40 U ферменту виявляється за допомогою кПЛР TaqMan.ДНК E.coli становить ≤ 0,1 пг/40 од.
Nприміткаs
1. Не струшуйте та не перемішуйте сильно, щоб запобігти інактивації ферменту.
2. Інгібітор РНКази активний при температурах від 25 ℃ до 55 ℃ і інактивується при ≥65 ℃.
3. Активність РНКази H, РНКази 1 і РНКази T1 не інгібується.
4. Діапазон pH для інгібування активності РНКази широкий (активний при pH 5-9), демонструючи максимальну активність при pH 7-8.
