Зворотна транскриптаза M-MLV Neoscript

Зворотна транскриптаза Neoscript — це зворотна транскриптаза, отримана шляхом мутаційного скринінгу гена M-MLV походження та експресії вірусу мишачого лейкозу Молоні в E.coli.Фермент усуває активність РНКази Н, має більш високу температурну толерантність і підходить для високотемпературної зворотної транскрипції.Таким чином, це корисно для усунення несприятливих впливів структури високого рівня РНК і неспецифічних факторів на синтез кДНК, а також має більш високу стабільність і здатність до синтезу зворотної транскрипції.Фермент має підвищену стабільність і здатність до синтезу зворотної транскрипції.

компоненти

1.200 Од/мкл зворотної транскриптази Neoscript

2.5 × буфер першого ланцюга (опціонально)

* 5 × Буфер першого ланцюга не містить dNTP, додайте dNTP під час підготовки реакційної системи

Рекомендоване застосування

1.Одноетапна qRT-ПЛР.

2.Виявлення РНК вірусу.

Умови зберігання

-20°C для тривалого зберігання, слід добре перемішати перед використанням, уникати частого заморожування-розморожування.

Визначення одиниці

Одна одиниця містить 1 нмоль dTTP за 10 хвилин при 37°C з використанням полі(А)•оліго(дТ)₂₅як шаблон/праймер.

Контроль якості

1.Електрофоретична чистота SDS-PAGE більше 98%.

2.Чутливість посилення, контроль від партії до партії, стабільність.

3.Відсутність екзогенної нуклеазної активності, відсутність екзогенної ендонуклеази або забруднення екзонуклеазою

Налаштування реакції для першого рішення Chain Reaction

1.Приготування реакційної суміші

Примітки:a/b: Виберіть різні типи праймерів відповідно до ваших експериментальних потреб.

2.Нагрійте при 65 °C протягом 5 хвилин і швидко охолодіть на льоду протягом 2 хвилин.

3.Додайте наступні компоненти до вищевказаної системи до загального об’єму 20 мкл і обережно перемішайте:

4. Будь ласка, виконайте реакцію відповідно до таких умов:

(1) Якщо використовується Random Primer, реакцію слід проводити при 25 ℃ протягом 10 хвилин, а потім при 50 ℃ протягом 30–60 хвилин;

(2) Якщо використовуються Oligo dT або спеціальні праймери, реакцію слід проводити при 50 ℃ протягом 30–60 хвилин.

5.Нагрійте при 95 ℃ протягом 5 хвилин, щоб інактивувати зворотну транскриптазу Neoscript і припинити реакцію.

6.Продукти зворотної транскрипції можна використовувати безпосередньо в реакції ПЛР і флуоресцентної кількісної реакції ПЛР або зберігати при -20 ℃ протягом тривалого часу.

ПЛР Рдія:

1.Приготування реакційної суміші

Примітки:a: Якщо додано занадто багато розчину першої ланцюгової реакції, реакція ПЛР може бути пригнічена.

2.Процедура ПЛР-реакції

Примітки

1.Підходить для оптимізації температури зворотної транскрипції в діапазоні 42℃~55℃.

2.Він має кращу стабільність, підходить для високотемпературної ампліфікації зворотної транскрипції.Крім того, це сприятливо для ефективного проходження через складні структурні ділянки РНК.Крім того, цепідходить для одноетапної мультиплексної флуоресцентної кількісної RT-PCR детекції.

3.Хороша сумісність з різними ферментами ПЛР-ампліфікації та підходить для високочутливих реакцій ЗТ-ПЛР.

4.Підходить для високочутливої ​​одноетапної флуоресцентної кількісної реакції RT-PCR, ефективно покращує швидкість виявлення низької концентрації шаблонів.

5.Підходить для створення бібліотеки кДНК.