BspQI
BspQI може рекомбінантно експресуватися в кишковій паличці, яка може розпізнавати певні сайти та вироблятися під
BspQI, ендонуклеаза рестрикції IIs, отримана з рекомбінантного штаму E. coli, який несе клонований і модифікований ген BspQI з Bacillus sphaericus.Він може розпізнавати певні сайти, а послідовність розпізнавання та сайти розщеплення такі:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Особливості продукту
1. Висока активність, Швидке травлення;
2. Низька зірчаста активність, що забезпечує точне різання «скальпелем»;
3. Без BSA і тваринного походження;
Чутливість до метилювання
Dam метилювання:Не чутливий;
Dсм метилювання:Не чутливий;
Метилювання CpG:Не чутливий;
Умови зберігання
Товар слід відправляти при ≤ 0 ℃;Зберігати при температурі -25 ~ - 15 ℃.
Буфер зберігання
20 мМ трис-HCl, 0,1 мМ EDTA, 500 мМ KCl, 1,0 мМ дитіотреїтол, 500 мкг/мл рекомбінантного альбуміну, 0,1% Trition X-100 і 50% гліцерину (pH 7,0 при 25°C).
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість ферменту, необхідного для перетравлення 1 мкг ДНК внутрішнього контролю за 1 годину при 50°C у загальному реакційному об’ємі 50 мкл.
Контроль якості
Аналіз чистоти білка (SDS-PAGE):Чистота BspQI була ≥95%, визначена аналізом SDS-PAGE.
РНКаза:10 ОД BspQI з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 4 годин при 50 ℃ не призводить до розкладання, як визначено за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.
Неспецифічна активність ДНКази:10 ОД BspQI з 1 мкг λ ДНК при 50 ℃ протягом 16 годин порівняно з 50 ℃ протягом 1 години не дає надлишку ДНК, як визначено за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.
Перев'язка та перерізання:Після розщеплення 1 мкг λДНК 10U BspQI фрагменти ДНК можна лігувати ДНК-лігазою Т4 при 16ºC.І ці ліговані фрагменти можна повторно вирізати за допомогою BspQI.
кишкова паличка ДНК: E.coli 16s рДНК-специфічне виявлення TaqMan qPCR показало, що залишок генома E.coli ≤ 0,1 пг/мкл.
Залишок білка хазяїна:≤ 50 ppm
бактеріальний Ендотоксин: LAL-тест, відповідно до Китайської Фармакопеї IV 2020 видання, метод тестування межі гелю, загальне правило (1143).Вміст бактеріального ендотоксину має бути ≤10 EU/мг.
Система та умови реакції
| компонент | Обсяг |
| BspQ I (10 Од/мкл) | 1 мкл |
| ДНК | 1 мкг |
| 10 x BspQ I буфер | 5 мкл |
| dd H2O | До 50 мкл |
Умови реакції: 50 ℃, 1 ~ 16 год.
Теплова інактивація: 80°C протягом 20 хв.
Рекомендована реакційна система та умови можуть забезпечити відносно хороший ферментний ефект перетравлення, це лише для довідки, будь ласка, зверніться до експериментальних результатів для отримання детальної інформації.
Застосування продукту
Розщеплення ендонуклеазою рестрикції, швидке клонування.
Примітки
1. Об’єм ферменту ≤ 1/10 реакційного об’єму.
2. Зоряна активність може виникнути, коли концентрація гліцерину перевищує 5%.
3. Активність розщеплення може виникнути, коли субстрат нижче рекомендованого співвідношення.
