Ультра Нуклеаза
UltraNuclease — це генно-інженерний ендонуклеаз, отриманий із Serratia marcescens, який здатний розкладати ДНК або РНК, дволанцюгові або одноланцюгові, лінійні або кільцеві в широкому діапазоні умов, повністю розщеплювати нуклеїнові кислоти на 5'-монофосфатні олігонуклеотиди з довжиною 3-5 основ .Після модифікації генної інженерії продукт був ферментований, експресований і очищений у Escherichia coli (E. coli), що зменшує в’язкість клітинного супернатанту та клітинного лізату в наукових дослідженнях, а також покращує ефективність очищення та функціональне дослідження білка.Його також можна використовувати в генній терапії, очищенні вірусів, виробництві вакцин, білкової та полісахаридної фармацевтичної промисловості як реагент для видалення залишків нуклеїнової кислоти.
Особливості продукту
| Номер CAS | 9025-65-4 |
| № EC | |
| Молекулярна вага | 30 кДа |
| Ізоелектрична точка | 6,85 |
| Чистота протеїну | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Конкретна діяльність | ≥1.1×106U/мг |
| Оптимальна температура | 37°C |
| Оптимальний pH | 8.0 |
| Активність протеази | негативний |
| Біонавантаження | <10 КУО/100 000 ОД |
| Залишковий білок клітини-господаря | ≤10 ppm |
| Важкий метал | ≤10 ppm |
| Бактеріальний ендотоксин | <0,25ЄС/1000U |
| Буфер зберігання | 20 мМ Tris-HCl, рН 8,0, 2 мМ MgCl2, 20 мМ NaCl, 50% гліцерину |
Умови зберігання
≤0°C транспортування; -25~-15°C Зберігання, термін дії 2 роки (уникати заморожування-розморожування).
Визначення одиниці
Кількість ферменту, використаного для зміни значення поглинання △A260 на 1,0 протягом 30 хвилин при 37 °C, pH 8,0, що еквівалентно розщепленій 37 мкг ДНК сперми лосося шляхом розрізання на олігонуклеотиди, було визначено як активну одиницю (U).
Контроль якості
Залишковий білок клітини-господаря: набір ІФА
•Протеаза Залишки: 250 KU/мл Ультрануклеаза прореагувала з субстратом протягом 60 хвилин, активності не виявлено.
•Бактеріальний ендотоксин: LAL-тест, Фармакопея Китайської Народної Республіки, том 4 (видання 2020 р.), метод випробування ліміту гелю.Загальні правила (1143).
•Біонавантаження: Фармакопея Китайської Народної Республіки Том 4 (видання 2020 р.) — Загальні відомості
Правила тесту на стерильність (1101), Національний стандарт КНР, GB 4789.2-2016.
•Важкий метал:ICP-AES, HJ776-2015.
Операція
Активність UltraNuclease значно пригнічувалася, коли концентрація SDS перевищувала 0,1% або EDTA
концентрація була понад 1 мМ. Поверхнево-активна речовина Triton X-100, Tween 20 і Tween 80 не впливали на нуклеазу
властивості, коли концентрація була менше 1,5%.
| Операція | Оптимальна експлуатація | Дійсна операція |
| Температура | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 мМ | 1-15 мМ |
| DTT | 0-100 мМ | >100 мМ |
| 2-меркаптоетанол | 0-100 мМ | >100 мМ |
| Іон одновалентного металу （Na+, K+ тощо） | 0-20 мМ | 0-200 мМ |
| PO43- | 0-10 мМ | 0-100 мМ |
Застосування та дозування
• Видалення екзогенної нуклеїнової кислоти з вакцинних продуктів, зниження ризику залишкової токсичності нуклеїнової кислоти та підвищення безпеки продукту.
• Зменшити в'язкість кормової рідини, спричинену нуклеїновою кислотою, скоротити час обробки та збільшити вихід протеїну.
• Видаліть нуклеїнову кислоту, яка загорнула частинку (вірус, тільце включення тощо), що сприяє
до вивільнення та очищення частки.
| Експериментальний тип | Виробництво білка | Вірус, вакцина | Клітинні препарати |
| Кількість клітин | 1 г сирої маси клітини (ресуспендують з 10 мл буфера) | 1л бродіння рідкий супернатант | 1л культури |
| Мінімальна доза | 250U | 100U | 100U |
| Рекомендоване дозування | 2500U | 25000U | 5000U |
• Обробка нуклеазою може покращити роздільну здатність і відновлення зразка для колонкової хроматографії, електрофорезу та блот-аналізу.
• У генній терапії нуклеїнову кислоту видаляють для отримання очищених аденоасоційованих вірусів.
