One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Каталожний номер: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) — це набір для швидкого виявлення RT-qPCR на основі зонда, придатний для кількісної одно- або мультиплексної ПЛР із використанням РНК як матриці (наприклад, РНК-вірусу).У цьому продукті використовується нове покоління ДНК-полімерази Taq, модифікованої антитілами, і одноетапної спеціалізованої зворотної транскриптази з оптимізованим буфером для швидкої ампліфікації, який має вищу швидкість ампліфікації, вищу ефективність і специфічність.Він підтримує збалансоване посилення як в одиночному, так і в мультиплексному зразках низької та високої концентрації за короткий час.
компоненти
1. Буфер 5×RT-qPCR (U+)
2. Суміш ферментів (U+)
Примітки:
a.Буфер 5×RT-qPCR (U+) містить dNTP і Mg2+;
b.Ферментна суміш (U+) включає зворотну транскриптазу, ДНК-полімеразу Hot Start Taq, інгібітор РНКази та UDG;
в.Використовуйте наконечники без РНКази, пробірки EP тощо.
Перед використанням ретельно перемішайте буфер 5×RT-qPCR (U+).Якщо після розморожування випадає будь-який опад, зачекайте, доки буфер не досягне кімнатної температури, перемішайте та розчиніть, а потім використовуйте їх у звичайному режимі.
Умови зберігання
Продукт поставляється з сухим льодом і може зберігатися при -25~-15 ℃ протягом 1 року.
Інструкції
1. Реакція система
| компоненти | Об'єм (20 мкл реакція) |
| 2 × буфер RT-qPCR | 4 мкл |
| Ферментна суміш (U+) | 0,8 мкл |
| Буквар Вперед | 0,1 ~ 1,0 мкМ |
| Реверс букваря | 0,1 ~ 1,0 мкМ |
| Зонд TaqMan | 0,05~0,25 мкМ |
| Шаблон | X мкл |
| Вода без РНКаз | до 25 мкл |
Примітки: Реакційний об'єм становить 10-50 мкл.
2. Велосипедний протокол (Sстандартний)
| Цикл крок | темп. | час | Цикли |
| Зворотна транскрипція | 55 ℃ | 10 хв | 1 |
| Початкова денатурація | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурація | 95 ℃ | 10 сек | 45 |
| Відпал/Нарощування | 60 ℃ | 30 сек |
| Велосипедний протокол (швидко) Цикл крок |
темп. |
час |
Цикли |
| Зворотна транскрипція | 55 ℃ | 5 хв | 1 |
| Початкова денатурація | 95 ℃ | 5 с | 1 |
| Денатурація | 95 ℃ | 3 с | 43 |
| Відпал/Нарощування | 60 ℃ | 10 с |
Примітки:
a.Температура зворотної транскрипції становить від 50 ℃ до 60 ℃, підвищення температури допомагає посилити складні структури та шаблони з високим вмістом CG;
b.Оптимальну температуру відпалу необхідно відкоригувати на основі значення Tm праймера та вибрати найкоротший час для збору сигналу флуоресценції на основі приладу ПЛР у реальному часі.
Примітки
Будь ласка, одягайте необхідні ЗІЗ, такі як лабораторний халат і рукавички, щоб забезпечити ваше здоров’я та безпеку!
