ДНКаза I
ДНКаза I (дезоксирибонуклеаза I) є ендодезоксирибонуклеазою, яка може перетравлювати одно- або дволанцюгову ДНК.Він розпізнає та розщеплює фосфодіефірні зв’язки з утворенням монодезоксинуклеотидів або одно- чи дволанцюгових олігодезоксинуклеотидів з фосфатними групами на 5′-кінці та гідроксилом на 3′-кінці.Активність ДНКази I залежить від Ca2+ і може бути активована іонами двовалентних металів, таких як Mn2+ і Zn2+.5мМ Ca2+ захищає фермент від гідролізу.У присутності Mg2+ фермент може випадковим чином розпізнавати та розщеплювати будь-яку ділянку будь-якого ланцюга ДНК.У присутності Mn2+ подвійні ланцюги ДНК можуть бути одночасно розпізнані та розщеплені майже в тому самому місці з утворенням плоских кінців фрагментів ДНК або липких кінців фрагментів ДНК з 1-2 виступаючими нуклеотидами.
Властивість продукту
ДНКазу I підшлункової залози великої рогатої худоби експресували в системі експресії дріжджів і очищали.
Cкомпоненти
| компонент | Обсяг | |||
| 0,1 КУ | 1KU | 5KU | 50 КУ | |
| ДНКаза I, без РНКази | 20 мкл | 200 мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Транспортування та зберігання
1. Стабільність при зберіганні: - 15 ℃ ~ -25 ℃ для зберігання;
2. Транспортна стійкість: транспортування під льодом;
3. Поставляється у вигляді: 10 мМ Tris-HCl, 2 мМ CaCl2, 50% гліцерину, pH 7,6 при 25 ℃.
Визначення одиниці
Одна одиниця визначається як кількість ферменту, яка повністю розкладає 1 мкг ДНК pBR322 за 10 хвилин при 37°C.
Контроль якості
РНКаза:5 ОД ДНКази I з 1,6 мкг MS2 РНК протягом 4 годин при 37 ℃ не призводить до розкладання, як визначено електрофорезом у агарозному гелі.
бактеріальний Ендотоксин:LAL-тест, відповідно до Китайської Фармакопеї IV 2020 видання, метод тестування межі гелю, загальне правило (1143).Вміст бактеріального ендотоксину має бути ≤10 EU/мг.
Інструкція з використання
1. Приготуйте реакційний розчин у пробірці без РНКази відповідно до наведених нижче пропорцій:
| компонент | Обсяг |
| РНК | Х мкг |
| 10 × буфер ДНКази I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКази (5U/мкл) | 1 ОД на мкг РНК |
| ddH2O | До 10 мкл |
2,37 ℃ протягом 15 хвилин;
3. Додайте буфер термінації, щоб зупинити реакцію, і нагрійте при 65 ℃ протягом 10 хвилин, щоб інактивувати ДНКазу I. Зразок можна безпосередньо використовувати для наступного експерименту з транскрипції.
Примітки
1. Використовуйте 1U ДНКазу I на мкг РНК або 1U ДНКазу I для менш ніж 1 мкг РНК.
2. Слід додати EDTA до кінцевої концентрації 5 мМ, щоб захистити РНК від деградації під час інактивації ферменту.
